VIM Knockout HAP1 Cell pool

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LM01010026025

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  • 产品描述
  • 细胞复苏
  • 细胞传代
  • 细胞冻存
  • 抗体验证结果
    • 品牌: ELEM粒曼
    • 商品名称: VIM Knockout HAP1 Cell pool
    • 商品编号: LM01010026025
    • Gene Symbol: VIM
    • NCBI Gene ID: 7431
    • Ensembl ID: ENSG00000026025
    • Uniprot ID: P08670
    • 宿主细胞 / 类型: HAP1/慢性粒细胞白血病
    • 规格: 1×10^6 cells/ 冻存管
    • 生长培养基: IMDM＋10% FBS＋1% P/S
    • 筛选标记: N/A
    • 生长特性: 贴壁细胞，上皮细胞样
    • 培养条件: 37℃,5% CO2 的培养箱，1/3 到 1/5 传代
    • 倍增时间: ~16 hours
    • 参考换液频率: 2~3次/周
    • 支原体检测结果: 阴性
    • 敲除效率（Sanger测序）: >70%
    • 蛋白质组验证结果: 已完成蛋白水平验证
    • 抗体货号: 添加中
    • 目标基因介绍: Involved with LARP6 in the stabilization of type I collagen mRNAs for CO1A1 and CO1A2.||Vimentins are class-III intermediate filaments found in various non-epithelial cells, especially mesenchymal cells. Vimentin is attached to the nucleus, endoplasmic reticulum, and mitochondria, either laterally or terminally.
    • 细胞开发路径: 采用CRISPR-RNP方法生成稳定KO Cell Pool；Sanger 测序结果显示KO Cell Pool敲除效率>70%
    • 应用: 高敲除效率的基因敲除细胞池（KO Cell Pool），特别适用于初步功能分析、复杂疾病模型的开发、精准药物筛选以及广泛的基因发现研究。KO pool能够无需繁琐的单克隆挑选过程，直接应用于多种类型的测定和分析，大幅提升实验效率。
    关键词:
    • VIM

  • 01.  在 37℃水浴中预热完全培养基。
    02.  将冻存管在 37℃水浴中解冻 1-2 分钟。
    03.  将冻存管转移到生物安全柜中，并用 70% 乙醇擦拭表面。
    04.  拧开冻存管管盖，将细胞悬液轻轻转移到含有 9mL 完全培养基的无菌离心管中。
    05.  在室温下以 125g 离心 5-7 分钟，弃上清。
    06.  用 5mL 的完整培养基重悬细胞沉淀，将细胞悬液转移到 T25 培养瓶中。
    07.  将细胞转移到 37℃,5% CO2 的培养箱中培养。
    08.  参考传代比例：1/3 到 1/5 传代，2-3 天长满。

  • 01.  待培养瓶中细胞汇合度至 80%-90% 以上，可进行细胞传代。
    02.  将培养基、PBS、胰酶（0.25%Trypsin_EDTA Gibco 25200-056） 等从 4℃冰箱中拿出， 置于 37℃水浴中温度接近 37℃时取出并在瓶子表面喷洒 75% 酒精后置于生物安全柜中。

    03.  从培养箱中取出待传代的培养瓶，瓶身喷洒 75% 酒精后置于生物安全柜中。
    04.  为避免冲散细胞，沿培养瓶上壁 PBS 润洗细胞，清洗细胞后弃去，T25 加 2mL。
    05.  加入对应体积的胰酶（T75 加 1.5mL， T25 加 0.5mL）  ，并轻轻晃动瓶身使胰酶平铺满细胞 底部。可根据实际情况适当增加或减少用量。约 1-2min 后大部分细胞脱落时，加入对应体积的完全培养基终止消化，并用 5mL 移液管轻轻吹打至细胞全部脱落。
    06.  将细胞悬液转移至 15mL 离心管，悬液 300g 离心 5min，弃上清。
    07.  移取 5mL 完全培养基重悬细胞，按需求调整接种比例，并补充培养瓶中完全培养基，T75 加至 13-15mL，T25 加至 5mL，加 1% 双抗。
    08.  盖上瓶盖拧紧后轻轻晃动瓶身，使细胞混合均匀后置于 37℃,5% CO2 培养箱中。

  • 01.  准备冻存液，并提前预冷。
    02.  确保待冻存的细胞满足冻存要求，用显微镜检查以下状态：健康的外观及形态特征、所处生 长周期（对数晚期）、无污染或衰退迹象。
    03.  对细胞进行消化及离心处理（具体步骤参考传代培养流程）
    04.  按照每管 1mL 的量添加冻存液重悬细胞，吹打均匀后分装至冻存管。
    05.  将细胞放在程序降温盒中，在 -80℃冰箱中冷冻。
    06.  后续将细胞转移到液氮罐中，以便长期储存。

  • 抗体验证中

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无

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TRPM4 Knockout HAP1 Cell pool

产品类型：LM EasyKO基因敲除试剂盒（RNP法）

基因敲除试剂盒信息

Gene Symbol

NCBI Gene ID

Ensembl ID

Uniprot ID

规格

物种

储存条件

试剂组成

基因敲除试剂盒说明

产品优势

应用