CDK2 HiBiT HEK293 Harbor™ Cell Line

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  • 产品描述
  • 细胞复苏
  • 细胞传代
  • 细胞冻存
  • 验证数据
    • 商品名称: CDK2 HiBiT HEK293 Harbor™ Cell Line
    • 商品编号: LMH01024123374
    • 物种: human
    • 细胞形态: 多边形，上皮样细胞，贴壁
    • 规格: 冻存管1×10⁶/管或T25活细胞/瓶，贴壁细胞汇合度70%以上，悬浮细胞量1×10⁶/瓶
    • 完全培养基成分: MEM+10%FBS+1%P/S
    • 抗性基因: puro，2ug/ml
    • 培养环境: 37℃,5% CO2 的培养箱，1/3到 1/5传代
    • 传代比例: 1/3-1/5
    • 传代频次: 2-3天
    • 支原体检测: 阴性
    • 靶标蛋白及功能: Serine/threonine-protein kinase involved in the control of the cell cycle; essential for meiosis, but dispensable for mitosis. Phosphorylates CTNNB1, USP37, p53/TP53, NPM1, CDK7, RB1, BRCA2, MYC, NPAT, EZH2. Triggers duplication of centrosomes and DNA. Acts at the G1-S transition to promote the E2F transcriptional program and the initiation of DNA synthesis, and modulates G2 progression; controls the timing of entry into mitosis/meiosis by controlling the subsequent activation of cyclin B/CDK1 by phosphorylation, and coordinates the activation of cyclin B/CDK1 at the centrosome and in the nucleus. Crucial role in orchestrating a fine balance between cellular proliferation, cell death, and DNA repair in human embryonic stem cells (hESCs). Activity of CDK2 is maximal during S phase and G2; activated by interaction with cyclin E during the early stages of DNA synthesis to permit G1-S transition, and subsequently activated by cyclin A2 (cyclin A1 in germ cells) during the late stages of DNA replication to drive the transition from S phase to mitosis, the G2 phase. EZH2 phosphorylation promotes H3K27me3 maintenance and epigenetic gene silencing. Phosphorylates CABLES1 (By similarity). Cyclin E/CDK2 prevents oxidative stress-mediated Ras-induced senescence by phosphorylating MYC. Involved in G1-S phase DNA damage checkpoint that prevents cells with damaged DNA from initiating mitosis; regulates homologous recombination-dependent repair by phosphorylating BRCA2, this phosphorylation is low in S phase when recombination is active, but increases as cells progress towards mitosis. In response to DNA damage, double-strand break repair by homologous recombination a reduction of CDK2-mediated BRCA2 phosphorylation. Phosphorylation of RB1 disturbs its interaction with E2F1. NPM1 phosphorylation by cyclin E/CDK2 promotes its dissociates from unduplicated centrosomes, thus initiating centrosome duplication. Cyclin E/CDK2-mediated phosphorylation of NPAT at G1-S transition and until prophase stimulates the NPAT-mediated activation of histone gene transcription during S phase. Required for vitamin D-mediated growth inhibition by being itself inactivated. Involved in the nitric oxide- (NO) mediated signaling in a nitrosylation/activation-dependent manner. USP37 is activated by phosphorylation and thus triggers G1-S transition. CTNNB1 phosphorylation regulates insulin internalization. Phosphorylates FOXP3 and negatively regulates its transcriptional activity and protein stability (By similarity). Phosphorylates CDK2AP2 (PubMed:12944431). Phosphorylates ERCC6 which is essential for its chromatin remodeling activity at DNA double-strand breaks (PubMed:29203878).
    • 标签蛋白介绍: 粒曼生物定点Knock-in 体系能特异剪切人类第19 号染色体上的 AAVS1 位点，生成DNA 双链断裂（DSB），触发DNA 的自然修复机制，诱导位点与 AAVS1 供体 DNA 克隆之间发生同源重组（HR），将供体克隆上的 DNA 片段整合到基因组上的 safe harbor 位点。HiBiT小分子生物发光标签，分子大小1.3 kDa（11 个氨基酸残基）凭借 “尺寸极小、检测灵敏、无背景干扰” 的核心优势，成为蛋白表达追踪、互作分析、活细胞成像等研究的理想工具，尤其适合对标签干扰敏感的实验场景.
    • 细胞背景: [HEK-293]细胞是剪切过的人腺病毒5（Ad5）转染的人胚肾细胞形成的永生化细胞，293 [HEK-293]细胞包含并表达转染的Ad5基因。早期报道中指出，293 [HEK-293]细胞基因组中含有腺病毒5（Ad5）基因组的左侧端和右侧端的DNA，但是现在明确了只存在其左侧端的DNA。经过对Ad5的插入点的克隆测序发现，Ad5的1-4344位线性核苷酸整合入293 [HEK-293]细胞19号染色体（19q13.2）。293 [HEK-293]细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主，可表达异常的玻连蛋白的细胞表面受体，由整合素β1亚单位和玻连蛋白受体α-v亚单位组成。

  • 01.  在 37℃水浴中预热完全培养基。
    02.  将冻存管在 37℃水浴中解冻 1-2 分钟。
    03.  将冻存管转移到生物安全柜中，并用 70% 乙醇擦拭表面。
    04.  拧开冻存管管盖，将细胞悬液轻轻转移到含有 9mL 完全培养基的无菌离心管中。
    05.  在室温下以 125g 离心 5-7 分钟，弃上清。
    06.  用 5mL 的完整培养基重悬细胞沉淀，将细胞悬液转移到 T25 培养瓶中。
    07.  将细胞转移到 37℃,5% CO2 的培养箱中培养。
    08.  参考传代比例：1/3 到 1/5 传代，2-3 天长满。

  • 01.  待培养瓶中细胞汇合度至 80%-90% 以上，可进行细胞传代。
    02.  将培养基、PBS、胰酶（0.25%Trypsin_EDTA Gibco 25200-056） 等从 4℃冰箱中拿出， 置于 37℃水浴中温度接近 37℃时取出并在瓶子表面喷洒 75% 酒精后置于生物安全柜中。

    03.  从培养箱中取出待传代的培养瓶，瓶身喷洒 75% 酒精后置于生物安全柜中。
    04.  为避免冲散细胞，沿培养瓶上壁 PBS 润洗细胞，清洗细胞后弃去，T25 加 2mL。
    05.  加入对应体积的胰酶（T75 加 1.5mL， T25 加 0.5mL）  ，并轻轻晃动瓶身使胰酶平铺满细胞 底部。可根据实际情况适当增加或减少用量。约 1-2min 后大部分细胞脱落时，加入对应体积的完全培养基终止消化，并用 5mL 移液管轻轻吹打至细胞全部脱落。
    06.  将细胞悬液转移至 15mL 离心管，悬液 300g 离心 5min，弃上清。
    07.  移取 5mL 完全培养基重悬细胞，按需求调整接种比例，并补充培养瓶中完全培养基，T75 加至 13-15mL，T25 加至 5mL，加 1% 双抗。
    08.  盖上瓶盖拧紧后轻轻晃动瓶身，使细胞混合均匀后置于 37℃,5% CO2 培养箱中。

  • 01.  准备冻存液，并提前预冷。
    02.  确保待冻存的细胞满足冻存要求，用显微镜检查以下状态：健康的外观及形态特征、所处生 长周期（对数晚期）、无污染或衰退迹象。
    03.  对细胞进行消化及离心处理（具体步骤参考传代培养流程）
    04.  按照每管 1mL 的量添加冻存液重悬细胞，吹打均匀后分装至冻存管。
    05.  将细胞放在程序降温盒中，在 -80℃冰箱中冷冻。
    06.  后续将细胞转移到液氮罐中，以便长期储存。

  • 粒曼检测HiBiT表达使用The Nano-Glo® HiBiT Lytic Detection System，该系统使用简单的加样-混合-读数检测操作流程，灵敏地定量细胞裂解物中的HiBiT标签蛋白。

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CDK4 HiBiT HEK293 Harbor™ Cell Line

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CDK19 HiBiT HEK293 Harbor™ Cell Line

产品类型： HiBiT报告细胞系

  阳性对照试剂盒（TRAC_gene） 定制靶基因敲除试剂盒-基础版 定制靶基因敲除试剂盒-加强版
试剂组成：
sgRNA引物 √ √ √
PCR引物 √ √ √
测序引物 √ √ √
细胞裂解液 √ √ √
cas9蛋白 √ × √
转染试剂 √ × √
产品规格 3次反应 5-10次反应 5-10次反应
交付周期 1-2周 1-2周 1-2周
交付标准 经验证，敲除效率最高可达100%，平均敲除效率90% 经验证，敲除效率在70%以上(通过对照试剂盒优化细胞转染条件后保障效率) 经验证，敲除效率在70%以上(通
过对照试剂盒优化细胞转染条件后 保障效率)
价格 RMB：899 RMB：1899 RMB：2699

基因敲除试剂盒信息

Gene Symbol

NCBI Gene ID

Ensembl ID

Uniprot ID

规格

物种

储存条件

试剂组成

基因敲除试剂盒说明

产品优势

应用