产品分类
Hela-Cas9 Cell（人宫颈癌细胞）
- 产品描述
- 细胞复苏
- 细胞传代
- 细胞冻存
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- 商品名称: Hela-Cas9 Cell（人宫颈癌细胞）
- 商品编号: LM01200-Cas9
- 物种: human
- 细胞形态: 贴壁细胞，上皮细胞样
- 规格: 冻存管1×10^6/管 或 T25活细胞/瓶
- 完全培养基成分: 1640+10%FBS
- 抗生素浓度: puromycin,0.5ug/ml
- 培养环境: 37℃，5%CO₂
- 传代比例: 1/2 到 1/4 传代
- 幻夜频次: 2~3次/周
- 支原体检测: 阴性
- 表达基因: Cas9蛋白，spcas9，CRISPR-cas9蛋白
- 细胞背景: Hela细胞是第一个来自人组织和连续培养维持非整倍体上皮样细胞系。Hela细胞是由G·D·Gey等在1951年从31岁女性黑人的宫颈癌建立。经原始组织切片样品的重新观察，Jones等将其诊断为腺癌。已知该细胞系含有人乳头状瘤病毒18序列，需在2级生物安全防护台操作。Hela细胞角蛋白阳性，p53表达量较低，但表达正常水平的Prb（视网膜母细胞瘤抑制因子）。
- 产品优势: 1.效率与便捷性 “即用型”平台，只需导入gRNA，操作简单，编辑效率高，节省时间和成本。 2.高通量筛选 是进行全基因组CRISPR筛选的理想基础平台，用于系统性发现功能基因。 3.一致性与可重复性 细胞群体遗传背景一致，Cas9表达稳定，实验结果更可靠，对照设置更严谨。 4.功能可扩展性 可构建表达dCas9、高保真Cas9等变体的细胞系，实现基因敲除以外的多种功能（调控、成像等）。"
- 应用: Cas9细胞系的核心优势在于它将基因编辑的核心工具“Cas9”内化为了细胞自身的稳定组成部分，从而将复杂的基因编辑实验转变为一种更高效、更稳定、更易于规模化的标准化流程，极大地推动了功能基因组学的研究。在基因敲除，CRISPR文库筛选，疾病模型，药物研发等多个前沿生物医学领域应用广泛。
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- 从液氮罐或者-80℃冰箱取出细胞冻存管，并迅速将冻存管置于37℃水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，可将冻存管置于干净的一次性PE手套内再置于水浴中。
- 待冻存管中液体融化后，立即取出，并用75%酒精纱布擦拭冻存管表面。
- 将冻存管置于生物安全柜中，并将冻存管中的液体转移到含有约9mL完全培养基的离心管中，300g，5min离心，弃上清。
- 用适量的完全培养基重悬细胞并转移到新的培养瓶中，并将细胞置于5% CO₂、37℃恒温培养箱静置培养。
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当细胞密度达到 80%以上时，可以进行传代，传代比例 1:2~1:4，2~3 天传代一次。具体操作如下：
- 吸取并弃掉培养瓶中培养基，加入适量PBS，轻轻晃动润洗细胞，然后将PBS 吸出。
- 该细胞不建议使用胰酶消化，可以直接吹打使之悬浮或者使用细胞刮。
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细胞汇合度达到80%-90%时可进行细胞冻存操作。自制冻存液成分：DMEM完全培养基+30%FBS+10%DMSO，为保证冻存细胞较高活力，冻存液最好提前配制并置于4℃冰箱预冷。
细胞冻存具体操作如下：
- 参考细胞传代过程，300g，5min离心，弃上清。
- 根据细胞沉淀量加入适量提前配制好并预冷的细胞冻存液（推荐1个T75培养瓶的细胞可加入3ml冻存液），轻轻吹打使细胞分散。
- 将细胞悬液转移至细胞冻存管中，1ml/管。冻存管需提前写好标签或者贴好标签。标签信息包含细胞名称，代次，冻存时间及操作人员姓名等。
- 将细胞冻存管置于细胞程序降温盒中，并将盒子置于-80℃冰箱中过夜。过夜后可将冻存管转移至液氮罐中长期保存。
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产品类型： Cas9细胞系
细胞系信息
物种
human
细胞形态
贴壁细胞，上皮细胞样
规格
冻存管1×10^6/管 或 T25活细胞/瓶
完全培养基成分
1640+10%FBS
支原体检测
阴性
抗生素浓度
puromycin,0.5ug/ml
培养环境
37℃，5%CO₂
传代比例
1/2 到 1/4 传代
传代频次
2~3次/周
表达基因
Cas9蛋白，spcas9，CRISPR-cas9蛋白
细胞系说明
细胞背景
Hela细胞是第一个来自人组织和连续培养维持非整倍体上皮样细胞系。Hela细胞是由G·D·Gey等在1951年从31岁女性黑人的宫颈癌建立。经原始组织切片样品的重新观察，Jones等将其诊断为腺癌。已知该细胞系含有人乳头状瘤病毒18序列，需在2级生物安全防护台操作。Hela细胞角蛋白阳性，p53表达量较低，但表达正常水平的Prb（视网膜母细胞瘤抑制因子）。
产品优势
1.效率与便捷性 “即用型”平台，只需导入gRNA，操作简单，编辑效率高，节省时间和成本。 2.高通量筛选 是进行全基因组CRISPR筛选的理想基础平台，用于系统性发现功能基因。 3.一致性与可重复性 细胞群体遗传背景一致，Cas9表达稳定，实验结果更可靠，对照设置更严谨。 4.功能可扩展性 可构建表达dCas9、高保真Cas9等变体的细胞系，实现基因敲除以外的多种功能（调控、成像等）。"
应用
Cas9细胞系的核心优势在于它将基因编辑的核心工具“Cas9”内化为了细胞自身的稳定组成部分，从而将复杂的基因编辑实验转变为一种更高效、更稳定、更易于规模化的标准化流程，极大地推动了功能基因组学的研究。在基因敲除，CRISPR文库筛选，疾病模型，药物研发等多个前沿生物医学领域应用广泛。
细胞培养说明
细胞复苏
- 从液氮罐或者-80℃冰箱取出细胞冻存管，并迅速将冻存管置于37℃水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，可将冻存管置于干净的一次性PE手套内再置于水浴中。
- 待冻存管中液体融化后，立即取出，并用75%酒精纱布擦拭冻存管表面。
- 将冻存管置于生物安全柜中，并将冻存管中的液体转移到含有约9mL完全培养基的离心管中，300g，5min离心，弃上清。
- 用适量的完全培养基重悬细胞并转移到新的培养瓶中，并将细胞置于5% CO₂、37℃恒温培养箱静置培养。
细胞传代
当细胞密度达到 80%以上时，可以进行传代，传代比例 1:2~1:4，2~3 天传代一次。具体操作如下：
- 吸取并弃掉培养瓶中培养基，加入适量PBS，轻轻晃动润洗细胞，然后将PBS 吸出。
- 该细胞不建议使用胰酶消化，可以直接吹打使之悬浮或者使用细胞刮。
细胞冻存
细胞汇合度达到80%-90%时可进行细胞冻存操作。自制冻存液成分：DMEM完全培养基+30%FBS+10%DMSO，为保证冻存细胞较高活力，冻存液最好提前配制并置于4℃冰箱预冷。
细胞冻存具体操作如下：
- 参考细胞传代过程，300g，5min离心，弃上清。
- 根据细胞沉淀量加入适量提前配制好并预冷的细胞冻存液（推荐1个T75培养瓶的细胞可加入3ml冻存液），轻轻吹打使细胞分散。
- 将细胞悬液转移至细胞冻存管中，1ml/管。冻存管需提前写好标签或者贴好标签。标签信息包含细胞名称，代次，冻存时间及操作人员姓名等。
- 将细胞冻存管置于细胞程序降温盒中，并将盒子置于-80℃冰箱中过夜。过夜后可将冻存管转移至液氮罐中长期保存。