点突变稳转细胞系构建
点突变是指利用CRISPR/Cas9或其他基因编辑技术，在特定位点引入单一核苷酸突变，包括碱基替换、插入或缺失等，点突变细胞可用于基因功能研究、疾病机制研究、药物研发及进化研究。详见粒曼公众号：技术专题 | 基因点突变细胞系的常见应用场景【收藏】
然而要想成功构建一株点突变细胞系并不简单，粒曼生物提供一对一的定制服务，针对客户需求设计最合适的技术方案，让您的科学研究事半功倍。粒曼提供真核细胞体外基因点突变细胞系构建服务，针对该服务，粒曼团队将定期更新Q&A，便于更好地服务我们的客户。Q&A【2411版】如下问题：
1. 粒曼点突变服务所采用的方法原理是什么？
构建细胞点突变模型的理论基础是基因的同源重组修复。当基因组DNA双链由于外部因素而断裂时，细胞中存在的DNA修复机制就会被激发，对断裂位点的DNA双链进行修复，根据修复方式的不同可分为同源重组修复（Homologous directed repair,HR）和非同源重组修复（Non-homologous end join, NHEJ）。同源重组修复（HR）是指DNA在修复的过程中以同源的DNA序列作为模板进行完美修复。非同源重组修复（NHEJ）是指细胞内的相关蛋白直接将断裂的DNA两端重新连起来，可能会随机引入或缺失一定数量的碱基。利用相应的方法可以促进细胞的同源重组修复的同时引入带有含有指定突变的供体DNA，可以完成对目标DNA的定点编辑。
2. 点突变需求咨询时，需要我提供哪些信息？
只需要提供细胞名称、靶点Gene Symbol、点突变位点信息即可（例如：A549细胞点突变A基因的第42位氨基酸，AAG突变成AGG）
3. 你们做点突变有哪几种类型？
一般的突变类型都能做，理论上30个碱基以内都属于点突变的范畴，包括不限于错义突变、同义突变、无义突变，具体看客户的需求。
4. 点突变的成功概率有多大？
点突变的成功率与细胞及靶点有关，在进行双链DNA修复时，发生同源重组的概率在0.3%-5%之间，粒曼生物开发了独有的方法可以在绝大部分细胞系中大幅提高同源重组修复的概率（8-12%），结合我们自动化单克隆分离和测序分析，可以有效提高分离到单克隆的成功率。
5. 你们做点突变有哪些优势？
①技术优势：对于上述方法构建的点突变细胞，没有引入任何额外的报告或抗性基因，可以最大限度保持对基因组非编辑位点的影响。
②方案设计：10年以上海外专研基因编辑团队，精心优化设计点突变方案，全方位考虑sgRNA切割PAM区域、切割特异性，donor序列的位置长度及修饰、测序验证引物的结合位点等多个细节。
③转染优势：粒曼生物3000+细胞成功编辑经验，保证转染效率的基础上，可很大程度的提高点突变成功率。
④单克隆筛选：粒曼生物已实现自动化单克隆铺板及挑选，通过高效的单克隆测序，大幅提高编辑成功率。
6. 点突变的周期是多久？
细胞系开发的周期与细胞倍增时间相关，倍增时间越短，开发周期越快。例如细胞倍增时间在24h以内，拿到点突变细胞株的周期为8-10周，周期会依据细胞倍增时间调整。
7. 点突变的交付内容是什么？
①细胞系：点突变阳性单克隆细胞株。我司提供多种细胞交付方式，如WT细胞+点突变细胞同时交付、客户可选择冻存管或T25活细胞。
②点突变细胞系构建报告：详细说明细胞培养方法、细胞构建流程、Sanger测序报告及原始数据。我司提供细胞系相关的所有售后，包括保证细胞无污染，基因型稳定传代，确保客户可以成功复苏细胞，及多次传代后的Sanger验证数据分析等服务。