产品分类
ELEMAb™ K-ε-GG抗体琼脂糖珠
- 产品描述
- 产品介绍
- 产品使用说明
- 其他说明
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- 商品名称: ELEMAb™ K-ε-GG抗体琼脂糖珠
- 商品编号: LMMSPTM0300
- 名称: 1. ELEMAb™ K-ε-GG抗体琼脂糖珠<br>2. IAP 清洗液
- 数量: 300 μg, 100 μL<br>10XBuffer,1.5mL
- 保存条件: 4℃保存3个月<br>4℃保存 1 年
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粒曼ELEMAb™ K-ε-GG抗体琼脂糖珠,用于您的泛素化修饰多肽富集实验! 通过使用特异性微珠结合抗体进行免疫沉淀以富集肽段，并结合液相色谱（LC）和串联质谱（MS/MS），对细胞蛋白质中的翻译后修饰（PTM）位点进行定量分析。这些位点包括磷酸化（ELEMAb™ Phospho） 、泛素化（ ELEMAb™ K-ε-GG） 、乙酰化（ ELEMAb™Acetyl）等。此方法使研究人员能够以高度的特异性和灵敏度分离、鉴定和定量大量的翻译后修饰细胞肽，为细胞和组织样本中的PTMs提供全面概览。
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1. 在4℃下，2,000g离心1min，去除ELEMAb™ K-ε-GG抗体琼脂糖珠上清，用预冷的1mL IAP buffer清洗两次，最后离心祛除上清。
2. 取0.5/1/2mg冻干多肽（经过蛋白质组学前处理获得的），加入1mL IAP buffer充分混匀溶解，后加入至琼脂糖珠（简称beads）中，在4℃，25 rpm旋转孵育1.5h。
(参考数据：2/4mg多肽量，使用对应30 μg抗体的Agrose珠、0.5/1mg多肽量,使用对应15 μg抗体的Agrose珠。)
3. 第1次清洗（Wash1）：2,000g离心1min，beads处于底部，吸走上清；加入1mL预冷IAP，颠倒5次，2,000g离心1min，吸走上清。共清洗三次。4. 第2次清洗（Wash2）：2,000g离心1min，吸走上清；加入1mL预冷H2O，颠倒5次，2,000g离心1min，吸走上清，共清洗三次。
5. PTM多肽洗脱：将50 μL的洗脱液(0.15%TFA buffer)添加到富集目标PTM的beads中，手指拨动10min。2,000g离心1min，beads沉到底部，吸走上清，将含有纯化目标多肽的上清液转移到干净的EP管中，重复一次，共获得100 μL。
6. SPE 脱盐：肽段脱盐(Stage tip C18)流程：(1)活化1:加入50 μL甲醇，6,000 rpm离心1min；(2)活化2:加入50 μL0.2%TFA，6,000 rpm离心1min；(3)上样:将样品加样到Tip头上，6,000 rpm离心1min,收集FT；(4)上样:FT再次加样到SPE板上，6,000 rpm离心1min,上样2次；(5)淋洗:加入50 μL0.2%TFA，6,000 rpm离心1min；6)洗脱:加入30 μL 80%acetonitrile/0.1%TFA,1,000g，离心1min;(7)悬转冻干:1,400 rpm。
7.LC-MS/MS 分析：加入20 μL 0.1%FA溶解冻干多肽，8 μL上样，60min梯度DIA-MS鉴定。注:肽段溶解到20 μL上样8μL保证样品可以分析2次。 -
多肽富集实验流程简述
1. 细胞裂解并形成多肽混合物
● 在含有尿素的缓冲液中裂解细胞， 用蛋白酶消化细胞蛋白， 用反相固相萃取法纯化得到的肽。
2. 多肽混合物与抗体琼脂糖珠结合
● 使用与蛋白A琼脂糖珠连接的抗体对多肽进行免疫亲和纯化。通过洗涤去除未结合的肽，然后用稀酸洗脱捕获的含PTM 的肽。
3. LC-MS/MS检测富集的多肽
● 在微吸头上进行反相纯化，以脱盐并分离肽与抗体。
● 将浓缩富集肽进行LC-MS/MS 分析。
产品类型： PTM富集抗体
产品试剂清单
名称
1. ELEMAb™ K-ε-GG抗体琼脂糖珠
2. IAP 清洗液
数量
300 μg, 100 μL
10XBuffer,1.5mL
保存条件
4℃保存3个月
4℃保存 1 年
产品介绍
粒曼ELEMAb™ K-ε-GG抗体琼脂糖珠,用于您的泛素化修饰多肽富集实验! 通过使用特异性微珠结合抗体进行免疫沉淀以富集肽段，并结合液相色谱（LC）和串联质谱（MS/MS），对细胞蛋白质中的翻译后修饰（PTM）位点进行定量分析。这些位点包括磷酸化（ELEMAb™ Phospho） 、泛素化（ ELEMAb™ K-ε-GG） 、乙酰化（ ELEMAb™Acetyl）等。此方法使研究人员能够以高度的特异性和灵敏度分离、鉴定和定量大量的翻译后修饰细胞肽，为细胞和组织样本中的PTMs提供全面概览。
产品使用说明
1. 在4℃下，2,000g离心1min，去除ELEMAb™ K-ε-GG抗体琼脂糖珠上清，用预冷的1mL IAP buffer清洗两次，最后离心祛除上清。
2. 取0.5/1/2mg冻干多肽（经过蛋白质组学前处理获得的），加入1mL IAP buffer充分混匀溶解，后加入至琼脂糖珠（简称beads）中，在4℃，25 rpm旋转孵育1.5h。
(参考数据：2/4mg多肽量，使用对应30 μg抗体的Agrose珠、0.5/1mg多肽量,使用对应15 μg抗体的Agrose珠。)
3. 第1次清洗（Wash1）：2,000g离心1min，beads处于底部，吸走上清；加入1mL预冷IAP，颠倒5次，2,000g离心1min，吸走上清。共清洗三次。
4. 第2次清洗（Wash2）：2,000g离心1min，吸走上清；加入1mL预冷H2O，颠倒5次，2,000g离心1min，吸走上清，共清洗三次。
5. PTM多肽洗脱：将50 μL的洗脱液(0.15%TFA buffer)添加到富集目标PTM的beads中，手指拨动10min。2,000g离心1min，beads沉到底部，吸走上清，将含有纯化目标多肽的上清液转移到干净的EP管中，重复一次，共获得100 μL。
6. SPE 脱盐：肽段脱盐(Stage tip C18)流程：(1)活化1:加入50 μL甲醇，6,000 rpm离心1min；(2)活化2:加入50 μL0.2%TFA，6,000 rpm离心1min；(3)上样:将样品加样到Tip头上，6,000 rpm离心1min,收集FT；(4)上样:FT再次加样到SPE板上，6,000 rpm离心1min,上样2次；(5)淋洗:加入50 μL0.2%TFA，6,000 rpm离心1min；6)洗脱:加入30 μL 80%acetonitrile/0.1%TFA,1,000g，离心1min;(7)悬转冻干:1,400 rpm。
7.LC-MS/MS 分析：加入20 μL 0.1%FA溶解冻干多肽，8 μL上样，60min梯度DIA-MS鉴定。注:肽段溶解到20 μL上样8μL保证样品可以分析2次。
其他说明
多肽富集实验流程简述
1. 细胞裂解并形成多肽混合物
● 在含有尿素的缓冲液中裂解细胞， 用蛋白酶消化细胞蛋白， 用反相固相萃取法纯化得到的肽。
2. 多肽混合物与抗体琼脂糖珠结合
● 使用与蛋白A琼脂糖珠连接的抗体对多肽进行免疫亲和纯化。通过洗涤去除未结合的肽，然后用稀酸洗脱捕获的含PTM 的肽。
3. LC-MS/MS检测富集的多肽
● 在微吸头上进行反相纯化，以脱盐并分离肽与抗体。
● 将浓缩富集肽进行LC-MS/MS 分析。