产品分类
NEK7 HiBiT A549 Harbor™ Cell Line
- 产品描述
- 细胞复苏
- 细胞传代
- 细胞冻存
- 验证数据
-
- 商品名称: NEK7 HiBiT A549 Harbor™ Cell Line
- 商品编号: LMH01100151414
- 物种: human
- 细胞形态: 多边形，上皮样细胞，贴壁
- 规格: 冻存管1×10⁶/管或T25活细胞/瓶，贴壁细胞汇合度70%以上，悬浮细胞量1×10⁶/瓶
- 完全培养基成分: MEM+10%FBS+1%P/S
- 抗性基因: puro，2ug/ml
- 培养环境: 37℃,5% CO2 的培养箱，1/3到 1/5传代
- 传代比例: 1/3-1/5
- 传代频次: 2-3天
- 支原体检测: 阴性
- 靶标蛋白及功能: NEK7（NIMA 相关激酶 7）是丝氨酸 / 苏氨酸激酶，核心功能包括调控细胞分裂（纺锤体组装）、激活 NLRP3 炎症小体（介导 IL-1β/IL-18 释放），该细胞系可响应 LPS+ATP 的炎症刺激，且保留对 NEK7 激酶抑制剂的敏感性。
- 标签蛋白介绍: 粒曼生物定点Knock-in 体系能特异剪切人类第19 号染色体上的 AAVS1 位点，生成DNA 双链断裂（DSB），触发DNA 的自然修复机制，诱导位点与 AAVS1 供体 DNA 克隆之间发生同源重组（HR），将供体克隆上的 DNA 片段整合到基因组上的 safe harbor 位点。HiBiT小分子生物发光标签，分子大小1.3 kDa（11 个氨基酸残基）凭借 “尺寸极小、检测灵敏、无背景干扰” 的核心优势，成为蛋白表达追踪、互作分析、活细胞成像等研究的理想工具，尤其适合对标签干扰敏感的实验场景.
- 细胞背景: A549细胞是由D·J·Griad通过肺癌组织移植培养建系，源自于一位58岁白人男性；A549能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。
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01. 在 37℃水浴中预热完全培养基。
02. 将冻存管在 37℃水浴中解冻 1-2 分钟。
03. 将冻存管转移到生物安全柜中，并用 70% 乙醇擦拭表面。
04. 拧开冻存管管盖，将细胞悬液轻轻转移到含有 9mL 完全培养基的无菌离心管中。
05. 在室温下以 125g 离心 5-7 分钟，弃上清。
06. 用 5mL 的完整培养基重悬细胞沉淀，将细胞悬液转移到 T25 培养瓶中。
07. 将细胞转移到 37℃,5% CO2 的培养箱中培养。
08. 参考传代比例：1/3 到 1/5 传代，2-3 天长满。 -
01. 待培养瓶中细胞汇合度至 80%-90% 以上，可进行细胞传代。
02. 将培养基、PBS、胰酶（0.25%Trypsin_EDTA Gibco 25200-056） 等从 4℃冰箱中拿出， 置于 37℃水浴中温度接近 37℃时取出并在瓶子表面喷洒 75% 酒精后置于生物安全柜中。03. 从培养箱中取出待传代的培养瓶，瓶身喷洒 75% 酒精后置于生物安全柜中。
04. 为避免冲散细胞，沿培养瓶上壁 PBS 润洗细胞，清洗细胞后弃去，T25 加 2mL。
05. 加入对应体积的胰酶（T75 加 1.5mL， T25 加 0.5mL） ，并轻轻晃动瓶身使胰酶平铺满细胞 底部。可根据实际情况适当增加或减少用量。约 1-2min 后大部分细胞脱落时，加入对应体积的完全培养基终止消化，并用 5mL 移液管轻轻吹打至细胞全部脱落。
06. 将细胞悬液转移至 15mL 离心管，悬液 300g 离心 5min，弃上清。
07. 移取 5mL 完全培养基重悬细胞，按需求调整接种比例，并补充培养瓶中完全培养基，T75 加至 13-15mL，T25 加至 5mL，加 1% 双抗。
08. 盖上瓶盖拧紧后轻轻晃动瓶身，使细胞混合均匀后置于 37℃,5% CO2 培养箱中。 -
01. 准备冻存液，并提前预冷。
02. 确保待冻存的细胞满足冻存要求，用显微镜检查以下状态：健康的外观及形态特征、所处生 长周期（对数晚期）、无污染或衰退迹象。
03. 对细胞进行消化及离心处理（具体步骤参考传代培养流程）
04. 按照每管 1mL 的量添加冻存液重悬细胞，吹打均匀后分装至冻存管。
05. 将细胞放在程序降温盒中，在 -80℃冰箱中冷冻。
06. 后续将细胞转移到液氮罐中，以便长期储存。 - 粒曼检测HiBiT表达使用The Nano-Glo® HiBiT Lytic Detection System，该系统使用简单的加样-混合-读数检测操作流程，灵敏地定量细胞裂解物中的HiBiT标签蛋白。
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产品类型： HiBiT报告细胞系
细胞系信息
物种
human
细胞形态
多边形，上皮样细胞，贴壁
规格
冻存管1×10⁶/管或T25活细胞/瓶，贴壁细胞汇合度70%以上，悬浮细胞量1×10⁶/瓶
完全培养基成分
MEM+10%FBS+1%P/S
抗性基因
puro，2ug/ml
培养环境
37℃,5% CO2 的培养箱，1/3到 1/5传代
传代比例
1/3-1/5
传代频次
2-3天
支原体检测
阴性
靶标蛋白及功能
NEK7（NIMA 相关激酶 7）是丝氨酸 / 苏氨酸激酶，核心功能包括调控细胞分裂（纺锤体组装）、激活 NLRP3 炎症小体（介导 IL-1β/IL-18 释放），该细胞系可响应 LPS+ATP 的炎症刺激，且保留对 NEK7 激酶抑制剂的敏感性。
标签蛋白介绍
粒曼生物定点Knock-in 体系能特异剪切人类第19 号染色体上的 AAVS1 位点，生成DNA 双链断裂（DSB），触发DNA 的自然修复机制，诱导位点与 AAVS1 供体 DNA 克隆之间发生同源重组（HR），将供体克隆上的 DNA 片段整合到基因组上的 safe harbor 位点。HiBiT小分子生物发光标签，分子大小1.3 kDa（11 个氨基酸残基）凭借 “尺寸极小、检测灵敏、无背景干扰” 的核心优势，成为蛋白表达追踪、互作分析、活细胞成像等研究的理想工具，尤其适合对标签干扰敏感的实验场景.
细胞背景
A549细胞是由D·J·Griad通过肺癌组织移植培养建系，源自于一位58岁白人男性；A549能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。
细胞培养说明
细胞复苏
01. 在 37℃水浴中预热完全培养基。
02. 将冻存管在 37℃水浴中解冻 1-2 分钟。
03. 将冻存管转移到生物安全柜中，并用 70% 乙醇擦拭表面。
04. 拧开冻存管管盖，将细胞悬液轻轻转移到含有 9mL 完全培养基的无菌离心管中。
05. 在室温下以 125g 离心 5-7 分钟，弃上清。
06. 用 5mL 的完整培养基重悬细胞沉淀，将细胞悬液转移到 T25 培养瓶中。
07. 将细胞转移到 37℃,5% CO2 的培养箱中培养。
08. 参考传代比例：1/3 到 1/5 传代，2-3 天长满。
细胞传代
01. 待培养瓶中细胞汇合度至 80%-90% 以上，可进行细胞传代。
02. 将培养基、PBS、胰酶（0.25%Trypsin_EDTA Gibco 25200-056） 等从 4℃冰箱中拿出， 置于 37℃水浴中温度接近 37℃时取出并在瓶子表面喷洒 75% 酒精后置于生物安全柜中。
03. 从培养箱中取出待传代的培养瓶，瓶身喷洒 75% 酒精后置于生物安全柜中。
04. 为避免冲散细胞，沿培养瓶上壁 PBS 润洗细胞，清洗细胞后弃去，T25 加 2mL。
05. 加入对应体积的胰酶（T75 加 1.5mL， T25 加 0.5mL） ，并轻轻晃动瓶身使胰酶平铺满细胞 底部。可根据实际情况适当增加或减少用量。约 1-2min 后大部分细胞脱落时，加入对应体积的完全培养基终止消化，并用 5mL 移液管轻轻吹打至细胞全部脱落。
06. 将细胞悬液转移至 15mL 离心管，悬液 300g 离心 5min，弃上清。
07. 移取 5mL 完全培养基重悬细胞，按需求调整接种比例，并补充培养瓶中完全培养基，T75 加至 13-15mL，T25 加至 5mL，加 1% 双抗。
08. 盖上瓶盖拧紧后轻轻晃动瓶身，使细胞混合均匀后置于 37℃,5% CO2 培养箱中。
细胞冻存
01. 准备冻存液，并提前预冷。
02. 确保待冻存的细胞满足冻存要求，用显微镜检查以下状态：健康的外观及形态特征、所处生 长周期（对数晚期）、无污染或衰退迹象。
03. 对细胞进行消化及离心处理（具体步骤参考传代培养流程）
04. 按照每管 1mL 的量添加冻存液重悬细胞，吹打均匀后分装至冻存管。
05. 将细胞放在程序降温盒中，在 -80℃冰箱中冷冻。
06. 后续将细胞转移到液氮罐中，以便长期储存。
验证数据