一叶知秋 | Hepa1-6细胞基因编辑指南【收藏】
2026-01-13
1.细胞背景
Hepa1-6 细胞（别称 HEPA 1-6）源自 C57/L 小鼠的 BW7756 肝癌衍生株，供体为雌性小鼠，组织来源明确为肝脏肿瘤组织。作为永生化肝癌细胞系，它被 ATCC 收录（编号 CRL-1830），生物安全等级为 1 级，操作门槛低，适合基础科研与应用研究场景。
其核心优势在于保留了肝癌细胞的关键生物学特征，同时与小鼠体内环境兼容性高，常被用于构建肝癌移植瘤、肝转移模型，也是 CRISPR/Cas9 文库筛选、基因功能验证的热门细胞模型。
2.细胞描述
物种：小鼠
组织：肝癌细胞
细胞形态：贴壁细胞
细胞倍增时间：~22-24 hours
培养条件
完全培养基成分：DMEM+10%FBS+1%P/S
培养环境：37℃、5%CO2
传代比例：1：3~1：5
传代频次：2~3 天传代一次
细胞形态图片
图1 Hepa1-6 细胞参考正常形态图
细胞特点
- 形态特征：典型的上皮细胞样形态，显微镜下呈多边形或短梭形，胞质丰富，核大而圆，贴壁生长时呈致密的“铺路石样” 排列，边界清晰。
- 生长特性：严格贴壁生长，增殖能力强，传代周期短（24-48 小时），汇合度达 80%-90% 时需及时传代，否则易出现细胞堆积、形态异常。
- 功能特征：保留肝癌细胞的代谢特性与成瘤能力，稳定表达肝脏相关标志物，且可通过基因改造（如稳定表达荧光素酶）实现体内示踪，不改变其原有增殖、迁移及成瘤特性。
细胞培养标准化操作指南
a. 传代操作流程
（1）吸出原培养基，加入 2mL PBS 润洗细胞层，去除残留血清（血清含胰蛋白酶抑制剂）；
（2）加入0.25% 胰蛋白酶溶液，37℃孵育 2-15 分钟，镜下观察细胞变圆、间隙增大时终止消化；
（3）加入 3-8mL 完全培养基中和胰酶，轻柔吹打至细胞呈单细胞悬液，1000rpm 离心 5 分钟；
（4）弃上清，用新鲜培养基重悬细胞，按 1:3-1:5比例接种到新培养瓶，补足培养基后置于培养箱培养。
b. 日常维护要点
- 换液频次：每 2-3 天更换一次完全培养基，去除代谢废物与死细胞；
- 污染防控：全程无菌操作，定期检测支原体污染，避免交叉污染；
- 代次管理：建议使用低代次细胞（≤20 代）进行实验，高代次细胞可能出现功能退化。
科研应用的优势
- 培养条件简单，增殖速度快，实验周期短，重复性好；
- 与小鼠同源性高，构建体内模型时免疫排斥反应弱，成瘤稳定；
- 对基因编辑工具（如 CRISPR/Cas9）耐受性好，易实现稳定转染或感染；
- 可通过稳定表达报告基因（如 FLuc），实现体内肿瘤生长、转移的无创监测。
3.常见问题与解决方案
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问题现象 |
核心原因 |
解决方案 |
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细胞贴壁差、脱落 |
消化过度损伤黏附分子，或 FBS 质量不佳 |
缩短消化时间（镜下观察细胞边缘收缩即终止），更换合格 FBS，接种后 24 小时内避免移动培养瓶 |
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细胞生长缓慢 |
培养基 pH 异常、CO₂浓度不足，或代次过高 |
调整 CO₂浓度至 5%，更换新鲜培养基；复苏低代次冻存细胞 |
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细胞形态异常（梭形化） |
吹打剧烈破坏细胞连接，或隐性支原体污染 |
传代时轻柔吹打，避免产生气泡；用支原体检测试剂盒验证，阳性则丢弃细胞 |
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复苏存活率低 |
冻存时未梯度降温，或复苏后未及时离心去 DMSO |
严格遵循梯度降温流程；复苏后务必离心去除 DMSO，用预热培养基重悬 |
4. Hepa1-6 细胞基因敲除示例
在肝癌研究领域，Hepa1-6 细胞如同秋日里的一片落叶，既承载着肝脏生理功能的基础信息，又映射出肿瘤发生发展的分子机制。作为应用最广泛的小鼠肝癌细胞系之一，它不仅是药物筛选、肿瘤转移研究的理想模型，更是基因编辑技术验证的常用工具。粒曼生物作为国内唯一高通量基因编辑领导者，目前积累了大量的敲除细胞现货，助力科研顺利推进！
2026 /
01-13
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