一叶知秋 | COS-1细胞基因编辑全解析
2025-06-23
1.细胞背景
COS-1 细胞是一种源自非洲绿猴（Cercopithecus aethiops）肾脏的成纤维细胞样细胞系，由 SV40 大T抗原稳定转染，使其能够支持含有 SV40 复制起点的质粒的高效复制。该细胞系因其高转染效率、快速增殖及SV40复制起点可实现高水平蛋白表达等特性，成为分子生物学和病毒学研究的经典模型。广泛应用于蛋白表达、信号通路研究及 病毒包装等研究。
2.细胞描述
物种：非洲绿猴
组织：肾
细胞形态：贴壁细胞，成纤维细胞
细胞倍增时间：~24-48 hours
培养条件
完全培养基成分：DMEM+10%FBS+1%青霉素/链霉素
培养环境：37℃、5%CO2
消化条件：0.25%胰酶（含EDTA)，37度消化1-2min
传代比例：1：2~1：3
传代频次：2~3 天传代一次
细胞形态图片
图1 COS-1细胞参考ATCC正常形态图
3.COS-1细胞培养常见问题及处理方案
COS-1细胞贴壁生长，成纤维细胞样，梭形或多角形，在显微镜下观察，细胞排列较为松散，胞质清晰，核明显。COS-1 细胞易于培养，适用于多种分子生物学实验。保持稳定的培养条件（温度、CO₂、培养基质量）和定期传代是维持细胞健康的关键。若遇到问题，应系统排查污染、消化条件和培养基成分等因素。
图2 COS-1细胞正常贴壁形态图
常见问题及处理方案
（1）细胞贴壁不良：可能因为胰酶消化过度，血清质量差。需要更换高质量血清，缩短消化时间，消化时观察细胞与细胞出现间隙即可终止消化。
（2）生长缓慢：培养基或血清质量不佳，需要更换优质培养基和血清。传代比例过大，一般推荐细胞汇和度达到80%，1：3-1：6传代，2-3d换一次液。
（3）细胞形态异常：检查PH值是否异常，及时更换培养基，避免细胞生长密度过大。定期进行支原体检测。
4.COS-1细胞基因敲除难点
4.1多倍体细胞
COS-1细胞由 SV40 大T抗原稳定转染CV-1细胞而来，CV-1 细胞系由 F.C. Jensen 等人于 1964 年 3 月从一只成年141天雄性非洲绿猴的肾脏中分离出来。核型分析显示，CV-1细胞是2.5倍体。染色体数目60条，出现在48%的细胞中，多倍体的发生率为4.4%。M1（可能缺失的N11）是均匀单拷贝的；M3（未知来源）在一些细胞中存在；N11在所有细胞中都是均匀单拷贝的，N16在大多数细胞中也是单拷贝的。在每个细胞中也检测到了X和Y染色体。多倍体细胞的编辑较正常二倍体来说，难度成倍增加。
粒曼生物团队采用独特的靶向早期外显子多个sgRNA 的策略，结合RNP电转的递送方式，显著提高了基因编辑的效率和准确性，经过多年的潜心钻研，优化了COS-1细胞的电转条件，目前多克隆最高的敲除效率可达到100%。
4.2 敲除验证
目前市面上的抗体基本上都是针对人源和鼠源靶点，非洲绿猴大多数基因的抗体不容易找到，粒曼生物结合基因水平sanger测序及蛋白质谱验证方法，可对COS-1基因敲除细胞进行基因水平及蛋白水平验证，提供完整的COS-1细胞敲除方案。
5.粒曼COS-1细胞基因敲除示例：
|
项目类型 |
细胞名称 |
基因名称 |
实验方法 |
多克隆阳性率 |
单克隆阳性率 |
蛋白敲除验证 |
|
基因敲除 |
COS-1 |
PACC1(TMEM206) |
RNP |
100% |
100% |
完全敲除 |
在WT及KO细胞中能检测到的特异性肽段信息及对应丰度值如下表
|
Sample |
Protein Intensity |
RATIO（KO/WT) |
|
COS1_WT |
15005.3 |
NA |
|
COS1_PACC1_KO |
NA |
2025 /
06-23
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