一叶知秋 | 基因敲除Raji细胞：淋巴瘤研究的“精准试金石”！
2025-11-17
1．细胞背景
在淋巴瘤与免疫研究的实验室里，Raji细胞是当之无愧的“常客”。而经过CRISPR基因编辑技术“量身定制”的基因敲除Raji细胞，更成为突破科研瓶颈的“利器”。今天，我们就来揭秘这款专属细胞模型的硬核实力。
Raji细胞是首个从人体中分离建立的B淋巴细胞系，其建立对免疫学、癌症研究（特别是伯基特淋巴瘤和白血病）及病毒学（如EB病毒研究）领域具有里程碑式的意义。该细胞株广泛应用于抗体生产、细胞凋亡、信号转导、药物筛选及病毒与宿主细胞相互作用等研究。
2. 细胞基本信息
- 细胞名称：Raji
- 细胞来源：一位11岁尼日利亚男性的伯基特淋巴瘤组织。
- 细胞物种：人
- 细胞组织来源：血液系统、B淋巴细胞
- 生物安全等级：BSL-1（但请注意：RAJI细胞含有EB病毒（Epstein-Barr virus, EBV）基因组，属于潜伏感染状态。虽不产生感染性病毒颗粒，但操作时仍需遵守相应实验室安全规范，尤其是对于血清EBV抗体阴性的人员。）
2.1 细胞形态
光学显微镜下：细胞呈悬浮生长，单个或成小团聚集。
形态描述：典型的淋巴母细胞样，圆形、透亮，折光性强，胞体大小不均一。
细胞倍增时间大约为24-36小时。实际倍增时间会因培养条件（如培养基、血清浓度、细胞密度）的不同而略有变化。
2.2 细胞培养条件
- 基础培养基：RPMI-1640，这是最适合淋巴细胞生长的培养基。
- 血清添加：需添加10%-20%胎牛血清（FBS）。常规培养使用10%即可，为促进生长或复苏后初期可提高至15%-20%。
- 抗生素：常规添加1%青霉素-链霉素双抗溶液以防止细菌污染。
- 培养环境：温度：37℃、气体条件：95%空气+5% CO₂、湿度：>90%。
- 培养容器：由于是悬浮细胞，可使用细胞培养瓶（T25,T75）或培养皿，无需包被。
2.3 细胞生长特点
- 生长方式：悬浮生长。细胞不贴壁，悬浮在培养基中，常见大小不等的细胞团块。
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4x |
10x |
- 代谢特点：生长速度较快，代谢旺盛，培养基易变黄（酸化）。需要频繁换液或传代。细胞适宜的生长密度范围为2×10⁵至1.5×10⁶cells/mL。密度过低生长缓慢，密度过高则会导致营养枯竭、代谢废物积累，影响细胞状态。
- 传代操作：非常简单，无需胰酶消化。传代比例：通常为1:3至1:5，根据细胞密度和生长速度每2-3天传代一次。传代方法：将细胞悬液收集至离心管中，1,000rpm（约150-200g）离心5分钟，弃去上清液，加入新鲜预热的完全培养基，轻轻重悬细胞团。按所需比例分到新的培养瓶中，补充新鲜培养基至推荐体积（如T25瓶加5-6mL）。
2.4 冻存与复苏
- 冻存液配方：90%FBS+10%DMSO，或使用商品化无血清细胞冻存液。细胞密度建议在5×10⁶至1×10⁷cells/mL。
- 复苏流程：快速解冻后，直接加入10mL预热的完全培养基，离心去除DMSO，用新鲜培养基重悬后接种到培养瓶中。复苏后初期可提高血清浓度（15%-20%）以帮助细胞恢复。
3. 常见培养问题及解决方案
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遇到的问题 |
可能原因 |
解决方案 |
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细胞生长缓慢 |
1.血清浓度过低或血清质量差； 2.细胞传代密度过低； 3.培养基pH值不当或营养耗尽； 4.支原体污染。 |
1.提高FBS浓度至15%-20%，或更换批号更好的血清； 2.确保传代后细胞密度低于2×10⁵cells/mL； 3.增加换液频率，确保CO₂浓度稳定； 4.进行支原体检测，如污染需丢弃细胞。 |
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细胞聚集成大团 |
1.细胞状态好时的自然现象； 2.密度过高或代谢废物过多。 |
1.轻微聚集是正常的，吹打分散即可； 2.及时传代，避免密度过高。可轻微吹打或使用细胞筛网解离大团块。 |
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细胞存活率低/大量死亡 |
1.传代时离心速度过快或操作过于剧烈； 2.冻存或复苏过程操作不当； 3.培养箱温度、CO₂浓度不稳定； 4.污染（细菌、真菌）。 |
1.严格控制离心力（200g以内），吹打时动作轻柔； 2.优化冻存复苏流程，确保快速解冻； 3.定期校准培养箱； 4.检查无菌操作，发现污染立即丢弃。 |
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培养基迅速变黄 |
1.细胞密度过高； 2.代谢过于旺盛。 |
1.降低传代后的接种密度或提高传代频率； 2.增加换液次数（如每2天半量换液一次）。 |
4. 基因敲除Raji 细胞有多难？这些技术痛点与解决方案请收好
在淋巴瘤研究、免疫机制解析及抗体药研发中，基因敲除Raji 细胞是公认的 “优质模型” 它作为首个人类 B 淋巴细胞系，自带 EB 病毒潜伏基因组，能精准模拟 B 细胞相关疾病特征。但不少科研人员在构建这类细胞时，常被 “敲除效率低”、“单克隆难获取” 等问题卡住。今天就拆解 Raji 细胞基因敲除的核心难点，附上经过实践验证的解决方案。
4.1 Raji 细胞基因敲除的 3 大核心难点
（1）细胞自身特性：悬浮生长+EB 病毒，增加操作复杂度
Raji 细胞是典型的悬浮细胞，与贴壁细胞（如 HEK293）不同，它不贴壁且易聚集成团，给转染、单克隆挑选带来天然障碍，转染时，悬浮细胞对脂质体、电转等方法的耐受性更低，常规质粒转染效率常低于30%，而慢病毒感染虽更适配，但需额外优化 MOI（感染复数），否则易因病毒过量导致细胞死亡；更特殊的是，Raji 细胞携带 EB 病毒基因组，虽处于潜伏状态不产生感染性颗粒，但病毒基因可能干扰细胞代谢，间接降低基因编辑效率（如部分 EB 病毒蛋白可能影响 Cas9 酶活性）。
（2）基因编辑效率：核型特征制约，敲除难度增加
从细胞遗传学角度看，Raji 细胞的核型并非完全稳定，虽以46条染色体的二倍体为主，但约 6%细胞为多倍体，且 1 号、4 号染色体同源片段大小存在差异（摘要 2、6）。这种核型特性导致等位基因编辑难度高，CRISPR/Cas9 需同时编辑同源染色体上的两个等位基因才能实现纯合敲除，而 Raji 细胞的核型差异可能让 gRNA 对不同等位基因的识别效率不一致，常出现 “单等位基因编辑”，纯合敲除率比常规二倍体细胞低 20%-30%。
（3）单克隆获取：悬浮细胞成克隆难，筛选周期长
单克隆是基因敲除细胞系的“黄金标准”，但 Raji 细胞的悬浮特性让这一步成为最大瓶颈：贴壁细胞可通过 “胰酶消化-有限稀释” 轻松获得单克隆，而 Raji 细胞悬浮生长，单个细胞在 96 孔板中易因缺乏细胞间信号支持而死亡，单克隆形成率常低于 20%。
4.2 粒曼团队针对性解决方案：从实验设计到操作落地
（1）sgRNA设计与序列验证
利用粒曼生物独特的sgRNA 设计策略，可以通过简单的PCR Sanger 测序快速确定基因编辑效率。(详见：服务指南 | 粒曼高通量基因敲除定制服务（RNP法）Q&A【2409版】)
（2）化学合成sgRNA，避免免疫激活
无论是病毒载体、DNA 质粒，还是体外转录tracrRNA，都不可避免地在一定程度上激活细胞内的DNA/RNA sensing 通路，从而导致细胞凋亡。这对于免疫细胞（抗原提呈APC，T细胞，B细胞）基因编辑的成败尤其重要。粒曼团队选择用化学修饰合成的sgRNA（欢迎咨询和订购），降低RIG-I 及一型干扰素通路的激活，从而最大程度上提高细胞存活率，也保证被编辑细胞的表型不因一型干扰素通路的激活而受到影响。
（3）RNP高效递送，低毒性、低脱靶效应
粒曼团队优化了Cas9 蛋白和Cas9 与sgRNA 最佳的混合配比，通过简单的脂质体转染（欢迎咨询和订购）或电转化的方式将RNP递送到细胞内，3 天即可完成靶向基因编辑。有效避免了病毒包装、质粒转染，等待蛋白表达，优化编辑流程等繁琐实验。与病毒与质粒表达系统相比，粒曼生物采取的RNP复合体递送只在细胞内稳定存在72 小时左右，大大降低了由于Cas9 和sgRNA持续表达所造成的脱靶效应。
（4）高效单克隆挑取流程及确认
粒曼团队优化单克隆铺板流程，结合我司自研的96孔/384孔板单克隆细胞自动化拍照设备（欢迎咨询和订购），一方面提高单克隆形成率，另一方面实时监控细胞生长情况，可在早期确认单克隆。
4.3、粒曼Raji细胞基因敲除示例：
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序号 |
项目类型 |
细胞名称 |
基因名称 |
实验方法 |
多克隆阳性率 |
单克隆阳性率 |
|
1 |
基因敲除 |
Raji |
MS4A1(CD20) |
RNP |
75% |
100% |
|
2 |
基因敲除 |
Raji |
LTA(TNFβ) |
RNP |
80% |
100% |
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所属分类：
公司新闻
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