一叶知秋 | PC-9细胞基因编辑全攻略！
2025-07-11
1. 细胞背景
PC9是从一位日本肺腺癌患者的肿瘤组织中分离得到的细胞系，常用于肺癌分子机制和药物筛选研究。该细胞携带表皮生长因子受体（EGFR）外显子19的缺失突变（E746-A750del），导致EGFR酪氨酸激酶区组成性激活，对EGFR-TKIs（如吉非替尼、厄洛替尼）高度敏感。广泛用于EGFR-TKI耐药机制研究（如T790M突变、MET扩增等）及新型靶向药物筛选。
2. 细胞描述
物种：人
组织：肺
细胞倍增时间：24h-48h
培养条件：RPMI 1640+10%FBS+1%PS,空气，95%；CO2，5%, 温度：37℃
消化条件:0.25%胰酶（含EDTA)，37度消化2-3min。
细胞形态图片
细胞形态
贴壁生长，成上皮细胞样，在培养皿中呈单层贴壁生长，细胞形态呈多边形或鹅卵石样，边界清晰。细胞核较大，核质比例较高，在融合度较高时，细胞能形成紧密的片状或岛状结构。
细胞易于培养，适用于多种分子生物学实验。保持稳定的培养条件（温度、CO₂、培养基质量）和定期传代是维持细胞健康的关键。若遇到问题，应系统排查污染、消化条件和培养基成分等因素。
3. 常见问题
（1）增殖缓慢或停滞：可能因为血清质量差或浓度不足，可更换优质血清；细胞过度传代导致遗传漂变，可使用低代次细胞；支原体污染，可检测并清除支原体；或者培养箱条件不稳定，可校正培养箱参数
（2）突然死亡或漂浮增多：可能是消化过度，可缩短胰酶消化时间；培养基PH异常，可检查CO2供应或更换新鲜培养基
（3）药物处理：可能由于某些药物诱导细胞凋亡，可以确认实验设计的药物浓度合理性
（4）冻存与复苏失败：可能是冻存液配制不当或冻存/复苏操作延迟，可使用程序降温盒，液氮长期保存，复苏时快速混匀稀释冻存液
4. PC-9细胞的基因敲除
作为非小细胞肺癌研究的"黄金标准"，PC-9细胞（携带EGFR 19外显子缺失突变）在靶向治疗耐药机制研究中不可替代。但如何在这个娇贵的细胞系中实现高效基因编辑？粒曼生物通过优化sgRNA设计方案和PC-9细胞的转染条件，最短可在4-6周拿到100%敲除细胞系。
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项目类型 |
细胞名称 |
基因名称 |
实验方法 |
多克隆阳性率 |
单克隆阳性率 |
蛋白敲除验证 |
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基因敲除 |
PC-9 |
Tp53 |
RNP |
100% |
100% |
完全敲除 |
wb验证结果
2025 /
07-11
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