一、细胞背景
在呼吸系统疾病研究、药物筛选的实验室里，有这样一种“明星细胞”—— BEAS-2B 细胞。作为永生化支气管上皮细胞系的代表，它凭借稳定的生物学特性，成为无数科研人的得力助手。今天就带大家全面解锁 BEAS-2B 细胞的 “前世今生” 和培养要点，新手也能快速上手～
什么是BEAS-2B 细胞？
BEAS-2B 细胞是永生化支气管上皮细胞系的 “标杆”，保留了正常支气管上皮细胞的关键生物学特性，比如上皮细胞特有的形态和功能特征。这使得它在哮喘、肺癌、慢阻肺等呼吸系统疾病机制研究，以及药物毒性筛查、气道修复实验中发挥着不可替代的作用。
二、细胞来源与基本信息
物种：人类
组织来源：正常人支气管上皮组织
永生化原因：通过腺病毒12-SV40 病毒杂交体感染实现永生化，避免了原代细胞传代次数有限的难题
分发机构：由美国ATCC（American Type Culture Collection）保存并全球分发，来源可靠，背景清晰
显微镜下的“真面目”
在显微镜下观察，BEAS-2B 细胞呈现典型的上皮样形态：
生长速度与培养关键参数
倍增时间：48-72 小时（受培养环境、传代次数影响，略有波动）
培养条件：
-
培养基：含 10% 胎牛血清（FBS）的 DMEM，添加青霉素（100U/ml）+ 链霉素（100μg/ml）防污染
-
环境：37℃恒温培养箱，5% CO₂，湿度保持 95%（放个水盘轻松搞定）
-
传代时机：细胞汇合度达 70%-80% 时传代，比例 1:3 至 1:5 为宜
-
换液频率：每 2-3 天换一次液，保证营养充足
生长特点：贴壁细胞的“小脾气”
BEAS-2B 细胞是典型的贴壁生长细胞，必须附着在培养瓶表面才能 “安居乐业”：
刚接种时生长较慢，适应环境后会加速增殖
密度过高会“闹脾气”—— 因接触抑制停止生长，及时传代才能保持活力
三、培养常见问题 & 解决方案
新手养细胞最怕出岔子？这些“坑” 帮你提前避开！
1. 污染了怎么办？
症状：培养基浑浊、颜色异常（变黄/ 绿），显微镜下可见杂菌
对策：立即丢弃污染细胞，彻底消毒培养箱和超净台；下次操作严格无菌—— 手消、台面擦、器皿灭菌一个都不能少！
2. 细胞长得慢吞吞？
可能原因：培养基过期、温度/CO₂异常、细胞老化
支招：换新鲜培养基，校准培养箱参数；传代次数过多时，果断换用新细胞株
3. 细胞贴壁差，总飘着？
关键原因：培养瓶表面处理不足、pH 不适、消化过度
解决：用胶原包被的培养瓶；调pH 至 7.2-7.4；传代时控制胰酶消化时间，别 “虐” 细胞
4. 形态变丑了（如梭形化、多核）？
排查方向：是否污染、培养基成分是否变质、是否过度传代
挽救：污染就丢弃，换液试错；及时冻存状态好的细胞，留条“后路”；严重异常时直接复苏新细胞
【小提醒】
BEAS-2B 细胞虽 “皮实”，但也需要细心呵护～ 定期冻存、规范操作，才能让它始终保持良好状态，为你的实验结果保驾护航！
四、BEAS-2B细胞基因敲除案例
BEAS-2B 细胞作为呼吸系统研究的常用模型，其基因功能研究常需通过基因敲除技术实现。但实际操作中，不少研究者会遇到效率低、细胞状态差等问题。
BEAS-2B 作为典型的上皮细胞，细胞膜结构紧密且存在极性，对常规转染方法（如脂质体转染）敏感性极低：脂质体转染易因细胞对载体的 “排斥”，导致CRISPR系统（sgRNA/Cas9）进入细胞的效率不足 30%；慢病毒感染虽常用于提高效率，但 BEAS-2B 细胞对病毒的易感性差，且病毒可能引发细胞应激反应，导致部分细胞凋亡。
BEAS-2B 细胞的增殖速度较慢（倍增时间 48-72 小时），且贴壁依赖性强，单克隆稀释后，低密度培养的细胞易因缺乏细胞间信号支持而凋亡，难以形成稳定克隆；若敲除的基因与细胞增殖、贴壁相关（如整合素家族基因），可能进一步抑制细胞生长，导致纯合子克隆“全军覆没”。
BEAS-2B 细胞对 CRISPR 系统中的 Cas9 蛋白或外源 DNA 较敏感，长时间表达Cas9 可能引发细胞内免疫反应（如 DNA 损伤应激通路激活），导致细胞形态异常（如梭形化）、增殖停滞；质粒转染时，外源 DNA 的整合可能干扰细胞自身基因表达，尤其对上皮细胞特有的分化相关基因影响显著，进而失去模型研究价值。
粒曼生物基于高通量基因编辑平台，以800+基因敲除/月的通量，经过大量的测试优化了BEAS-2B细胞的基因敲除流程，多克隆编辑效率可达100%。
|
序号
|
项目类型
|
细胞名称
|
基因名称
|
实验方法
|
多克隆敲除效率
|
单克隆成功率
|
|
1
|
基因敲除
|
BEAS-2B
|
GPX4
|
RNP
|
95%
|
100%
|
|
2
|
基因敲除
|
BEAS-2B
|
RAB26
|
RNP
|
100%
|
100%
|
|
3
|
基因敲除
|
BEAS-2B
|
FASTKD1
|
RNP
|
90%
|
100%
|
|
4
|
基因敲除
|
BEAS-2B
|
TATDN1
|
RNP
|
90%
|
100%
|
|
5
|
基因敲除
|
BEAS-2B
|
SEC11A
|
RNP
|
80%
|
100%
|
|
6
|
基因敲除
|
BEAS-2B
|
GNG2
|
RNP
|
70%
|
100%
|
|
7
|
基因敲除
|
BEAS-2B
|
PCGF6
|
RNP
|
90%
|
100%
|
