一叶知秋 | HMC3 细胞培养要点与基因敲除挑战全解析

2025-03-24

1. 细胞背景

HMC3细胞（Human Microglia Clone 3）是通过SV40永生化人胎儿大脑原代小胶质细胞培养物建立的，转染的人小胶质细胞保留了原代小胶质细胞的特性。HMC3细胞是可以无限期生长的同质细胞群，是小胶质细胞功能生化分析的一个便捷模型，可用于研究小胶质细胞中各种转染基因的表达调控。

小胶质细胞在生理条件下处于相对静止的状态M0，发挥“免疫监视”作用。在病理状态下，会迅速激活并伴随转录适应性功能变化，成为 M1和M2两种表型的极化状态，M1表型起到促进炎症发展的作用，M2表型起到抑制炎症的作用。小胶质细胞极化在在神经退行性疾病、视网膜缺血再灌注损伤、创伤性脑损伤等多种疾病中均发挥了关键作用，深入研究其作用机制和调控方法，有望为疾病的治疗提供新的靶点和策略。本文将从培养技巧与基因敲除难点两大方向展开，助您高效开展实验！

2. 细胞描述

物种：人

组织：脑

细胞形态：贴壁生长，巨噬细胞样

细胞倍增时间：~24-48 hours

培养条件

完全培养基成分：MEM+10% FBS+1%P/S

培养环境：37℃、5%CO2

传代比例：1：2~1：3

传代频次：2~3 天传代一次

细胞形态图片

图1 HMC3细胞ATCC参考正常形态图

3.HMC3细胞培养要点

3.1 细胞如何传代？

该细胞贴壁弱，消化时间短，注意控制消化时间。第一次对该细胞进行消化时要摸索最佳时间。弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化3 -5min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

图2 建议细胞密度80%左右传代

3.2 细胞碎片多如何处理？

细胞培养时可能会出现少量黑点，属于正常现象。当细胞状态比较差时，细胞表面会出现较多黑点。此时可以通过每天清洗细胞并换液来调整细胞状态，换液时可适当提高血清比例至15%-20%，同时要保证细胞密度较高，HMC3细胞具有密度依赖性，当细胞密度在50%左右时细胞生长速度最快且状态维持较好，故传代比例控制在1:2-1:3左右最佳。