一叶知秋 | Jurkat细胞RNP法基因敲除，助力T细胞研究突破：精准靶向，解锁免疫奥秘
2025-04-02
1. 细胞背景
Jurkat， Clone E6-1（人T淋巴细胞白血病细胞）是Jurkat-FHCRC细胞株(Jurkat细胞株的衍生)的一个克隆。Jurkat, Clone E6-1细胞来源于一个14岁男孩的外周血，经佛波酯和外源凝集素或抗T3单克隆抗体(两种类型的诱导都需要)诱导后可产生大量IL-2。
Jurkat细胞的应用非常广泛，主要用于研究免疫学和癌症生物学相关的问题。具体来说，它们可以用于以下几个方面：细胞免疫功能研究：研究人类T细胞的免疫功能，包括T细胞活化、分化、诱导细胞死亡等；信号传导研究：研究细胞内信号传导途径，例如T细胞受体信号传导、细胞周期调控等；药物效应研究：用于研究癌症发生、转移、治疗等问题。
2. 细胞描述
物种：人
组织：外周血
细胞形态：悬浮细胞，淋巴细胞样，T淋巴细胞
细胞倍增时间：~36-48 hours
疾病：T细胞白血病
应用：3D细胞培养，免疫学，免疫系统疾病研究
培养条件
完全培养基成分：1640+10% FBS+1%P/S
培养环境：37℃、5%CO2
传代比例：1：2~1：5
传代频次：3~4天传代一次，不超过3*106/ml，建议将活细胞密度控制在1*105-1*106/ml；当细胞密度到达80%时，及时进行传代，以防细胞过度生长状态变差
细胞形态图片
Jurkat细胞为悬浮生长，理想的状态是均匀的成团生长。
图1 Jurkat细胞ATCC参考正常形态图
3.常见问题
3.1细胞碎片较多且较易分化
细胞碎片较多且较易分化，可能是因为细胞受到机械刺激或培养基变质等原因，导致细胞死亡或损伤，形成碎片；在某些情况下，Jurkat细胞也可能会发生分化，导致细胞形态和功能发生变化，可以通过控制培养条件（如：适当细胞密度）和培养基组分（如：选择优质澳洲胎牛血清）等方法来调整细胞状态，也可以使用细胞因子或化学物质等对细胞分化状态进行人工干预。
图2 Jurkat细胞碎片图片
可以从以下方面来调整：
① 通过离心去除碎片或调整培养条件等去调整细胞状态。
② Jurkat细胞有密度依赖性，细胞密度低时，生长较慢，培养密度维持在4 ~8×10^5 /mL为宜；超过1.0~2.0 ×10^6 /mL则需要传代。
③ Jurkat细胞对机械力较敏感。正常培养时，应尽量避免吹打力道过大。暴力吹打会使细胞分化和死细胞增加。
④ 血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。
⑤ 如生长过程中观察到细胞团中心发黑，代表细胞团过大，这个时候可以轻柔的吹散较大的细胞团，但是不用强行吹散成单个细胞。
3.2 细胞复苏活率低
冻存复苏活率低，Jurkat细胞作为悬浮细胞，容易受到冻存的影响。提高冻存密度（一般建议冻存时细胞密度为2-3*106/mL），或使用免疫细胞专用冻存液，可提高细胞复苏活率。另外，Jurkat细胞有密度依赖性，细胞密度低时生长缓慢，如果在复苏后发现细胞活力低，可先把细胞转移至6孔板中，待细胞恢复状态后再转移至T25继续培养。我们发现Jurkat细胞复苏后一般需要2-3天的状态调整期，待适应条件且密度达到一定数量之后，状态变好，可以来做后续的实验。
4.Jurkat细胞基因敲除
在免疫学与肿瘤治疗研究领域，Jurkat细胞作为人源性T淋巴细胞白血病模型，一直是探索T细胞受体信号、免疫调控机制及药物筛选的“黄金工具”。然而，基因功能的复杂性常成为研究瓶颈。如何快速获得高纯度、表型稳定的Jurkat基因敲除细胞？如何确保敲除效率与细胞活性的完美平衡？粒曼生物以CRISPR/Cas9技术为核心，提供“靶向设计-高效敲除-蛋白验证”一站式服务，助您加速科研进程！
Jurkat细胞基因敲除示例：
参考文献
[1] Weiss A, et al. The role of T3 surface molecules in the activation of human T cells: a two-stimulus requirement for IL-2 production reflects events occurring at a pre-translational level. J. Immunol. 133: 123-128, 1984. PubMed: 6327821
[2] Gillis S, Watson J. Biochemical and biological characterization of lymphocyte regulatory molecules. V. Identification of an interleukin 2-producing human leukemia T cell line. J. Exp. Med. 152: 1709-1719, 1980. PubMed: 6778951
[3] Berninghausen O, Leippe M. Necrosis versus apoptosis as the mechanism of target cell death induced by Entamoeba histolytica. Infect. Immun. 65: 3615-3621, 1997. PubMed: 9284127
[4] Churchill MJ, et al. The rev-responsive element negatively regulates human immunodeficiency virus type 1 env mRNA expression in primate cells. J. Virol. 70: 5786-5790, 1996. PubMed: 8709194
[5] Kolanus W, et al. alphaLbeta2 integrin/LFA-1 binding to ICAM-1 induced by cytohesin-1 a cytoplasmic regulatory molecule. Cell 86: 233-242, 1996. PubMed: 8706128
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