一叶知秋 | LLC基因敲除细胞:肺癌研究的“精准手术刀”

2025-04-27

1.细胞背景

Lewis肺癌细胞(Lewis Lung Carcinoma,LLC)作为经典的小鼠肺癌模型,因其高转移性和强侵袭性,广泛用于肿瘤微环境、转移机制及抗肿瘤药物开发研究。通过基因敲除技术靶向调控关键基因,可深度解析肿瘤发生机制并加速治疗策略优化。本文精选热门LLC基因敲除细胞株,助您抢占肿瘤研究前沿!

2.细胞描述

物种:小鼠

组织来源:肺癌;C57BL/6

细胞别称:LL/2;LL2;LLC1;LLC;Lewislungcarcinomaline1;Lewislungcarcinoma;Lewis-Lung;LewisLung

细胞形态:半贴半悬,贴壁部分圆形和梭形并存

细胞倍增时间:~24-36 hours

培养条件

完全培养基成分:DMEM+10% FBS+1%P/S

培养环境:37℃、5%CO2

传代比例:1:2~1:3

传代频次:2~3 天传代一次

细胞形态图片

LLC

图1 LLC细胞参考正常形态图

LLC细胞特点

LLC细胞为贴壁悬浮混合型细胞,在细胞培养过程中,部分细胞贴壁生长,部分细胞悬浮生长。参考ATCC图片,贴壁细胞呈现出多角形或圆形,悬浮细胞则为圆形。常见的贴壁悬浮混合型细胞有LLC(小鼠Lewis肺癌细胞)、BV2(小鼠小胶质细胞)、RAW264.7(小鼠巨噬细胞)、PC3(人前列腺癌细胞)等。

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3.细胞培养常见问题及处理方法

3.1 细胞不贴壁

如果是由于培养条件变化或培养基不适应等原因发生漂浮,导致细胞漂浮,应尽快给细胞换液,培养一段时间后可有效提高细胞贴壁率。

活细胞刚收到时,由于快递过程的剧烈摇晃会导致细胞不贴壁,若收货时细胞发生脱落漂浮,可以按照以下步骤处理:

(1)到货后不开瓶处理(尽量减少晃动)放培养箱静置4h。待细胞状态恢复后进行处理。

(2)收集瓶内培养基1200rpm,5min离心收集漂浮细胞。

(3)用完培轻轻吹起细胞沉淀(不要反复吹打),接种至新的T25培养瓶中。

(4)将瓶内贴壁的细胞进行消化处理,根据细胞的密度可考虑接种至新的T25培养瓶或合并至步骤3的培养瓶中

(5)24h后观察细胞状态,理论上会有大部分细胞贴壁,随着培养时间延长,细胞伸展开同时贴壁比例随之增加。如果48h后观察细胞仍然没有贴壁,可以测一下细胞活率,低于50%则重新复苏细胞。

复苏后的细胞,一般48h可以看到大部分细胞贴壁,随着培养时间延长,细胞伸展开同时贴壁比例随之增加。

图2 LLC细胞生长状态示例

4.LLC细胞基因敲除应用

4.1肿瘤转移研究的“金标准”:

LLC细胞易形成肺转移灶,模拟人类肺癌转移过程,是研究EMT(上皮-间质转化)和血管生成的理想模型。敲除特定基因可明确其在转移、耐药或免疫逃逸中的功能(如VEGF、PD-L1等)。

4.2药物开发的“试金石”:

敲除耐药相关基因(如MDR1、BCL-2),可筛选靶向药物并验证其敏感性。 敲除HIF-1α的LLC细胞对缺氧环境适应性下降,显著增强放疗效果(参考文献:Cancer Res, 2021)。

4.3免疫治疗研究的桥梁:

构建免疫检查点基因敲除株(如PD-L1 KO),可评估CAR-T或PD-1抑制剂疗效。

5.粒曼LLC细胞基因敲除示例: